细胞培养中常见的5大“误区”，看看你占了几个？

01. 误区一

实验室的细胞是不是都从公司买的？不全是！

1. 刚进实验室，师兄师姐给我的细胞

2. 直接联系细胞商购买各种细胞

3. 刚从隔壁课题组借了一盘细胞

细胞来源可能很多，但是我们需要确认的是：

1. 了解课题研究目的，以及细胞的基本信息，

2. 选择正确渠道购买优质细胞，并附质检报告

3. 正确培养与传代，存储种子细胞便于后续研究

常用细胞来源分为：原代细胞分离与永生化细胞系。

原代细胞分离大概分为以下流程：

需要用到的试剂：

1. 原代干细胞分离液（组织分离液）

2. 重组表达、无动物源成分、不含胰酶。

适用类型：

脐带、脂肪、胎盘、牙髓等多种原代分离的干细胞，以及主动脉内皮、绒毛膜等。

02.误区二

借来的细胞或名字相同的细胞，体系一样就可以养好！

1. 所有产品都一样，为什么细胞养不好？

2. 细胞名字一样，培养体系应该不会有差别吧？

3. 血清一样，换个基础培养基应该问题不大的吧？

开展细胞培养前，需要认真学习细胞的基本知识，了解不同来源细胞的培养特性。对于不同来源的同一种细胞，不同培养体系下的形态学、功能学等存在差异，需要验证是否符合研究需要后再开展大规模培养。借来的细胞需要适应环境与操作后再做功能学研究或者更换试剂等。

1. 培养环境、人员操作、产品批间差等均有影响

2. 请参考官方网站或文件，使用正确体系

3. 不同细胞对基础培养基中一些成分适应性不同

4. 不论什么来源的细胞，都要按照正确的体系培养，才能获得可重复的实验结果！

03.误区三

细胞复苏操作不及时，接种后观察不及时！

1. 水浴锅的温度未到37℃就解冻细胞

2. 同时操作多个冻存管，融化时间延长

3. 冻存管未做保护直接全部浸没于水浴锅中

4. 复苏后就等着细胞长满，期间不观察

这样的问题您有犯过吗？细胞冻存复苏讲究“慢冻快融”，当然快融的操作也很重要。不然只能是无用功。

1. 水浴锅37℃解冻，最好不超过1 min

2. 建议单管操作，避免交叉污染

3. 冻存管置于无菌PE手套中，再浸没融化

4. 根据细胞特性，复苏后及时观察细胞生长状态

04.   误区四

细胞一定要长满点再传代，或多传点长得快！

1. 细胞要长到90%-100%才可以传代

2. 细胞融合度80%左右仍继续培养

3. 细胞传代密度高点，1传1或1传2

您是不是也是这样认为呢？

但是，以下问题您有考虑过吗？

1. 细胞长期高密度生长，更容易老化

2. 对数期细胞增殖速度快，容易聚团漂浮

3. 细胞传代密度根据研究需要和细胞生长特性优化

05.误区五

胰酶消化要等到细胞变圆才能终止，多吹打变成单细胞！

关于细胞消化以下做法是错误的示范手法：

1. 接触新细胞培养，消化时间和其它细胞一致

2. 消化10 min仍然未脱落，用力吹打

所有细胞都是很娇弱的，做好细胞消化，我们需要了解以下几点：

1. 了解新细胞的特性再做培养与研究

2. 难消化的细胞可放37℃温箱或换更强的消化液

3. 细胞间隙明显，大片脱落可移动即可终止消化

4. 有些细胞消化后不会变圆形，半沙状即可终止

NOTE：

1. 不是细胞形成单个圆形才算消化完全

2. 不是所有细胞消化后都会变圆形

转自：细胞之邦公众号

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